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产品手册
腺病毒专题
发布时间:2021-05-12   浏览:2362次

  重组腺病毒(AdV)是一种复制缺陷的腺病毒载体系统,在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒5型(Ad5),其基因组是36kb长的线性双链DNA。腺病毒可通过自身的纤维(fiber)和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞,然后从内吞体(endosome)转移到细胞质和细胞核内,借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的复制组装。一个完整的病毒生活周期会引发细胞死亡从而释放出病毒粒子。在腺病毒生产和使用过程中,除293细胞能提供反式E1蛋白外,其它细胞都不能进行腺病毒扩增,因此大大提高了生物安全性,获得的重组病毒非常稳定。

  本公司的腺病毒包装采用单质粒的AdEasy包装系统。目的基因克隆至腺病毒穿梭质粒(pAdtrack-CMV),将穿梭质粒线性化后与腺病毒骨架质粒利用同源重组获得重组腺病毒质粒,转染293A细胞包装病毒。

  本公司提供以下服务:

  1.可以将外源目的DNA序列或目的shRNA/miRNA克隆至腺病毒的穿梭载体,进一步包装成腺病毒,用于过表达外源基因或者干扰相关基因的表达。

  2.可设计具有sgRNA及CRISPR/Cas9的腺病毒质粒,包装病毒,用于靶向敲除基因。

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  应用实例

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  腺病毒感染细胞应用(a)图:PAdeasy-GFP在293细胞的表达。(b)图:带GFP的腺病毒感染原代肝细胞48-72h的荧光图像。

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  腺病毒介导的shRNA干扰作用在小鼠肌肉中的应用:

  在小鼠的两条腿的胫骨前肌分别注射对照腺病毒和装载Baf60c(smarcd3)干扰片段的腺病毒,每天两次,连续两天,5天后取肌肉组织,QPCR检测Baf60c的表达情况,Western blot检测信号通路蛋白的表达情况,以及组织染色。


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