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产品手册
慢病毒专题
发布时间:2021-05-12   浏览:3783次

  慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分 裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点,因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。

  本公司慢病毒包装系统采用常用的第二代3质粒包装系统,慢病毒穿梭质粒(Lentiviral-shuttlevector,pLenti-X-puro)及其辅助包装原件载体质粒(psPAX2和pMD2.G),大大降低了发生同源重组的概率,降低了产生复制能力病毒的可能性。同时,本系统的慢病毒颗粒是自身失活型(SIV)病毒,即病毒感染靶细胞后不会再感染其他细胞,也不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒,从而提高了安全性。

  本公司提供shRNA干扰慢病毒、gRNA慢病毒等定制 服务:

  1.重组慢病毒穿梭质粒设计不同组织特异性启动子,包装的病毒感染特定组织细胞,整合到基因组,达到稳定表达蛋白。慢病毒穿梭质粒(Lentiviral-shuttlevector)带有puromycin抗性基因,包装的病毒在感染目的靶细胞后,可通过加入puromycin进行选择性筛选,从而获得稳定表达shRNA或者稳定表达特定基因的细胞株。

  2.可设计具有带有U6启动子的sgRNA及CRISPR/Cas9慢病毒穿梭质粒,包装病毒用于靶向敲除基因。

  3.人工设计合成的shRNA/miRNA引入慢病毒穿梭质粒,包装的病毒感染靶细胞后可干扰目标基因的表达。

  本公司通过超滤浓缩纯化病毒,可产出高滴度慢病毒,可高效感染靶组织或靶细胞。

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  应用实例

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Cell,2015,160(6),1246-1260

  慢病毒介导的sgRNA基因敲除系统,在肺癌细胞中的应用

  A:利用慢病毒建立Cas9-GFPKPD非小细胞肺癌细胞系,将靶向多个基因的sgRNA慢病毒感染上述细胞系,再将该细胞系注射至Nu/Nu免疫缺陷小鼠皮下,以观察肿瘤细胞的肺转移;B:注射一周后,检测发现与肿瘤细胞生长相关的Nrf2和Pten蛋白的表达量显著降低。



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